合肥沃腾膜分离设备优优彩票APP官网!

合肥市包河区
花园大道17号

138-6611-2688
liuhd@c4ubail.com

8:30-17:00
周一到周五

公司新闻

一种重组蛋白质发酵液的分离方法

2016-03-27 22:55:34 合肥沃腾膜分离设备优优彩票APP 已读

[0037] 实施例2利用陶瓷膜过滤重组人转铁蛋白发酵液

[0038] 应用自有技术构建的表达人转铁蛋白的酿酒酵母工程菌,经发酵所获得发酵液的菌体浓度为20%,蛋白质浓度0.lg/L,蛋白质分子量为75KD。在24-26°C下,将上述发酵液(pH值为6.0)加压到0.2Mpa后直接进入陶瓷膜过滤系统(陶瓷膜孔径为1.2微米),发酵液中的酵母细胞、悬浮固体等被截留在膜的进料一侧,通过回流通路回到原料罐,而渗透液即为重组蛋白质产物溶液。当湿重达到60% (进料30L,渗透液为15L)时,开始通过清洗通路进行流加水操作,共流加水12L,当检测到回流的滤渣液中湿重70%,滤渣液上清蛋白质浓度低于0.005g/L时停止收集,获得上清液15L,累计获得上清液30L。具体实验数据见下表。[0039]

[0040] 实施例3利用陶瓷膜过滤重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体发酵菌体裂解液

[0041] 应用自有技术构建的表达重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的大肠杆菌工程菌,经发酵所获得发酵液的菌体浓度为10%,目标蛋白质浓度为5g/L,蛋白质分子量为18KD。在4°C下超声裂解菌体,将上述裂解液(pH值为7.0,固形物浓度为7%,离心称重法测定)在10-15°C下加压到0.5Mpa后直接进入陶瓷膜过滤系统(陶瓷膜孔径为0.2微米),裂解液中的微生物菌体碎片、悬浮固体等被截留在膜的进料一侧,通过回流通路回到原料罐,而渗透液即为重组蛋白质产物溶液。当湿重达到50% (进料30L,渗透液为25L)时,开始通过清洗通路进行流加水操作,共流加水10L,当检测到回流的滤渣液中湿重70%,滤渣液上清蛋白质浓度低于0.lg/L时停止收集,获得上清液11L,累计获得上清液36L。发酵液

电泳结果如图3所示。具体实验数据见下表。

[0042]

平均通量43L/m2.h 总收率:97%,其中以离心收率为100%

[0044] 实施例4利用陶瓷膜过滤重组L-山梨酮脱氢酶发酵菌体裂解液

[0045] 利用自有专利技术(ZL200310116831.7)构建的基因工程菌进行发酵,所获得大肠杆菌发酵液的菌体浓度为4%,蛋白质浓度2g/L,蛋白质分子量为45KD,

[0046] 将发酵液进行收集后,5000r/min下离心5min收集菌体,用pH8。0的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液洗涤3次,按照1:10的比例将离心后的菌体溶解于超声缓冲液(预冷的生理盐水或pH8。0的Tris-HCl)中,500w,10s/10s破碎20分钟。在4°C下,将上述超声裂解液(pH值为8。0)加压到0。3Mpa后直接进入陶瓷膜过滤系统(陶瓷膜孔径为0。5微米),裂解液中的悬浮固体(包括细胞碎片和包涵体)被截留在膜的进料一侧,通过回流通路回到原料罐,而渗透液即为重组蛋白质产物溶液。当湿重达到30%时,开始通过清洗通路进行流加水操作,共流加水25L,当检测到回流的滤渣液上清蛋白质浓度低于0。05g/L时停止收集,共获得上清液61L。发酵液电泳结果如图4所示。裂解液在陶瓷膜过滤系统中的通量衰减曲线见附图6。具体实验数据见下表。

[0047]

[0048] 实施例5利用陶瓷膜过滤,实现更好的层析衔接

[0049] 将重组人血白蛋白发酵液分别进行离心(15°C,5000转/分,30分钟)和陶瓷膜过滤(实施例1)处理,离心后上清中有微量的固体悬浮,陶瓷膜透过液的澄清度明显较高;将上述离心后上清和陶瓷膜透过液以同样的纯化工艺(申请人自有专利技术EP1504031B1,层析柱采用BPG140)处理,陶瓷膜透过液的层析上柱压力较低(同样线性流速下,离心后上清的上柱压力为0.15MPa,陶瓷膜透过液的上柱压力为0.09Mpa)。同样的上柱压力条件下,陶瓷膜透过液的上柱流速较高(离心后上清的上柱流速为80cm/h,陶瓷膜透过液的上柱流速120cm/h),上样时间较离心后上清缩短了 50%,提高了层析工作效率,从而实现了更好的工艺衔接。

[0050] 实施例6陶瓷膜过滤的工业化放大试验

[0051] 利用重组人血白蛋白发酵液进行三个阶段的实验。第一阶段利用单个陶瓷膜完成,操作的具体参数为:陶瓷膜孔径为0.5微米,发酵液循环过滤系统温度维持25V’泵入压力0.3MPa。当湿重达到60%时,开始通过清洗液通路进行流加水操作,流加水体积为初始发酵液体积的0.5倍,当检测到回流的滤渣液中湿重70%,滤渣液上清蛋白质浓度低于lg/L时停止收集。第二阶段和第三阶段分别利用系统化集成16个和288个陶瓷膜(膜面积分别为3.5平方米和63平方米)进行中试和生产水平的实验,实验参数与第一阶段相同。

[0052] 对比三个阶段所收获的分离后的发酵液质量,澄清度相当,层析上柱压力维持在

0.09MPa,上柱流 速均达到120cm/h。

 

搜索

新闻动态

联系我们

合肥沃腾膜分离设备优优彩票APP

地址: 合肥市包河区花园大道17号
电话: 0551-6712-6688
手机:138-6611-2688
QQ:1346055708

推荐新闻

热门关键词

优优彩票平台 亚洲彩票官网 乐盈彩票官网 优优彩票官网 亚洲彩票平台 亚洲彩票app 亚洲彩票平台 荣鼎国际 乐盈彩票APP 乐盈彩票APP